番茄潰瘍病是如何檢測得出的？

番茄潰瘍病是由克雷伯氏菌屬引起的細菌性病害，具有強傳染性，可通過種子、土壤、灌溉水及農事操作傳播。典型癥狀包括：幼苗莖部水漬狀病斑、成株期莖稈潰瘍裂口、葉片萎蔫卷曲、果實“鳥眼斑”及維管束變褐，嚴重時導致全株枯死。

檢測技術體系：從宏觀到微觀的精準識別

1. 田間癥狀診斷（初步篩查）

典型癥狀觀察：

幼苗期：子葉水漬狀病斑，莖部出現(xiàn)細小潰瘍，嚴重時幼苗萎蔫死亡。

成株期：莖稈中下部出現(xiàn)縱向裂口，分泌白色或琥珀色菌膿；葉片邊緣黃化卷曲，形成“燒邊”現(xiàn)象；果實表面出現(xiàn)黑色小點（鳥眼斑），周圍有白色暈圈。

根部與維管束：根部腐爛，維管束變褐，橫切莖稈可見褐色條紋。

局限性：癥狀易與細菌性斑點病、真菌性病害混淆，需結合其他方法驗證。

2. 實驗室檢測（精準定性）

細菌分離培養(yǎng)：

樣本采集：取病株莖稈潰瘍部、葉片病斑邊緣或果實病健交界處組織。

培養(yǎng)基選擇：使用選擇性培養(yǎng)基如CMM（Clavibacter Medium）或NBY（Nutrient Broth Yeast），Cmm在CMM上形成黃色菌落，在NBY中呈桿狀、無芽孢、革蘭氏陽性。

生化鑒定：通過過氧化氫酶陽性、氧化酶陰性、明膠液化、硝酸鹽還原等生化反應確認菌種。

血清學檢測：

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）：利用特異性抗體檢測Cmm抗原，適用于大規(guī)模樣本篩查，靈敏度高。

免疫熒光/免疫電鏡：通過熒光標記抗體直接觀察細菌形態(tài)，或用電鏡觀察菌體結構。

分子生物學檢測：

PCR（聚合酶鏈式反應）：使用特異性引物（如針對16S rRNA、plasmid基因）擴增Cmm DNA片段，通過凝膠電泳或實時熒光定量PCR（qPCR）確認。

LAMP（環(huán)介導等溫擴增）：快速、低成本，適合田間現(xiàn)場檢測，無需復雜設備。

基因測序：對擴增產物進行測序，通過BLAST比對確認菌種，適用于新毒株或變異株鑒定。

3. 生物測定與病理學驗證

致病性測試：將分離菌株接種健康番茄植株，觀察是否引發(fā)典型潰瘍癥狀，驗證其致病性。

組織病理學：切片觀察維管束病變、細胞壞死及細菌侵染路徑，結合染色技術（如Gram染色）確認細菌存在。

檢測流程與質量控制

樣本采集與保存：無菌操作采集病株樣本，置于無菌袋或離心管中，4℃冷藏或-20℃冷凍保存，避免污染。

實驗室操作規(guī)范：嚴格遵循無菌操作流程，使用消毒器械，避免交叉污染；設置陽性/陰性對照，確保實驗可靠性。

結果判定：結合癥狀、培養(yǎng)、生化、分子及病理學結果綜合判定，必要時進行重復實驗或第三方驗證。